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和“蛋白酶体抑制剂”相关的论文

  • siNrf2对万珂诱导甲状腺癌细胞凋亡影响及其机制的探讨 相关:甲状腺肿瘤/病理学 蛋白酶体抑制剂 氧化应激
  • 目的:明确Nrf2对蛋白酶体抑制剂万珂诱导甲状腺癌细胞凋亡的影响及其作用途径。方法:选取Nrf2高表达的8305C细胞,用微小RNA干扰技术转染细胞,采用实时定量PCR法和蛋白质印迹法分析封闭效果,而细胞内GCLCmRNA的表达、还原型谷胱甘肽(GSH)的含量和细胞凋亡率,分别由实时定量PCR法、比色法和流式细胞仪法测得。并测定siNrf2对万珂诱导其他甲状腺癌细胞凋亡的影响。结果:与对照组相比,siNrf2组在培养液和万珂处理中Nrf2mRNA和蛋白都显著减少,P〈0.01;随机序列核酸siRNA和错位型siNrf2差异无统计学意义,P〉0.05。与对照组相比,siNrf2能够增加万珂诱导8305C、8505C、KTC1和KTC3的细胞凋亡率,差异均有统计学意义,P〈0.01;FRO和KTC2的细胞凋亡率差异无统计学意义,P〉0.05。与随机序列核酸siRNA组相比,空白对照组中siNrf2转染组GCLCmRNA及GSH减少,P〈0.05;万珂处理组中siNrf2转染组两者减少更显著,P〈0.01。GSH和NAC(GSH的前体并能提高GSH的含量)抑制了siNrf2促万珂诱导甲状腺癌细胞凋亡作用。结论:Nrf2抵消万珂诱导甲状腺癌细胞凋亡作用,至少部分是通过GCLC转录激活和随后GSH的生成实现的。
  • 氧化应激对蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡影响的研究 相关:甲状腺肿瘤/病理学 细胞凋亡 蛋白酶体抑制剂
  • 目的:探讨氧化应激在启动蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法:选取4种人甲状腺未分化癌细胞系ARO、FRO、KTC2和8305C,分别设空白对照组、万珂处理组和万珂+钛剂联合组;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡情况;Caspase-3活性测试法检测各组细胞Caspase-3活性;用荧光分光光度计法检测各组细胞蛋白酶体活性和细胞内ROS水平。结果:与空白对照组相比,蛋白酶体抑制剂万珂对人甲状腺癌细胞系FRO和KTC2具有很强的细胞凋亡诱导作用;使FRO和KTC2细胞中Caspase-3的活性显著增高,P〈0.01;可持续快速抑制蛋白酶体活性,但在4组细胞中差异无统计学意义,P〉0.05;万珂可显著提高活性氧簇在FRO和KTC2甲状腺癌细胞中的表达。万珂组与万珂+钛剂组活性氧簇水平在4种甲状腺癌细胞中差异均有统计学意义,P〈0.05;在FRO和KTC2甲状腺癌细胞中,万珂组与万珂+钛剂组中的细胞凋亡率差异有统计学意义,P〈0.01。结论:蛋白酶体抑制剂可以提高活性氧簇在甲状腺未分化癌细胞中的表达,促进肿瘤细胞的凋亡,并且这种效应可以被抗氧化剂所抑制。
  • 蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡机制的探讨 相关:甲状腺肿瘤/病理学 蛋白酶体抑制剂 P38丝裂原活化蛋白激酶
  • 目的:探讨p38MAPK信号转导通路参与蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡的作用机制。方法:选取甲状腺癌细胞系,利用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的三种抑制剂抑制磷酸化途径,利用微小RNA干扰技术转染细胞,封闭p38MAPK。用蛋白质印迹法检测红系衍生的核因子2相关因子2(Nrf2)及p38MAPK的表达,实时定量PCR检测细胞内GCLC mRNA的表达,测定还原型谷胱甘肽的含量,流式细胞仪法检测甲状腺癌细胞凋亡率。结果:在甲状腺癌细胞系8305C细胞中,与对照组相比,p38MAPK的抑制剂SB203580和sip38MAPK均能够抑制蛋白酶体抑制剂诱导的Nrf2细胞核易位(P〈0.01),并使随后的GCLC mRNA表达减少、GSH含量减少(P〈0.01),显著提高蛋白酶体抑制剂诱导的甲状腺癌细胞凋亡率(P〈0.01),而其他2种抑制剂和随机序列核酸siRNA无上述作用。结论:蛋白酶体抑制剂通过p38MAPK途径激活Nrf2的细胞核易住,进而导致GCLC的诱导作用和谷胱甘肽生成的连锁反应,成为蛋白酶体抑制剂在甲状腺癌细胞中的一种抗凋亡机制。
  • Nrf2对蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡影响的观察 相关:甲状腺肿瘤/病理学 细胞凋亡 蛋白酶体抑制剂
  • 目的:红系衍生的核因子2相关因子2(Nrf2)在蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法:选取一系列人甲状腺未分化癌细胞系FRO、KTC1、KTC2、KTC3、8305C和8505C,分别设空白对照组和万珂处理组;蛋白质印迹法检测甲状腺癌细胞中Nrf2蛋白表达情况;共聚焦显微镜检测Nrf2甲状腺癌细胞核定位;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡情况。结果:与FRO和KTC2细胞相比,Nrf2在人甲状腺癌细胞系8505C和8305C细胞中基础水平呈现高表达,万珂诱导后的表达增加更高,但对万珂诱导的细胞凋亡表现出不敏感,4种细胞的细胞凋亡率分别为(51.98±3.01)%、(46.92±2.72)%、(17.33±4.18)%和(7.97±1.01)%;万珂可诱导8505C和8305C细胞中的Nrf2细胞核易位。结论:Nrf2抑制蛋白酶体抑制剂诱导的甲状腺癌细胞凋亡,其抗凋亡作用可能源于蛋白酶体抑制剂诱导其细胞核转位。
  • 氧调节蛋白150诱导甲状腺癌细胞凋亡机制的研究 相关:甲状腺肿瘤 病理 蛋白酶体抑制剂
  • 目的:探讨氧调节蛋白150(ORP150)是否能够通过调控内质网应激来对抗蛋白酶体抑制剂介导的甲状腺未分化癌细胞凋亡。方法:选取人甲状腺未分化癌细胞系FRO、8305C和8505C,分别设空白对照组、siORP150组、随机序列核酸(siRNA)组、0RP150组、siCHOP组和siORP150+siCHOP组,加或不加蛋白酶体抑制剂MO132(2μmol/L)处理;利用微小RNA干扰技术封闭ORP150及cHOP的表达;实时定量PCR法、蛋白质印迹法及流式细胞仪(FCM)检测CHOP基因表达及各组甲状腺未分化癌细胞凋亡率。结果:FRO、8305C和8505C细胞中,ORP150表达载体组中CHOPmRNA较空白载体组显著降低,P〈0.01;siORP150组中CHOPmRNA较随机序列核酸siRNA组显著升高,P〈0.01。在FRO细胞中,蛋白质印迹法检测CHOP得到相似的结果。FCM检测结果显示,FRO细胞中siORP150组细胞凋亡率为87.72%,而这种增敏效应被siCHOP所抑制,其细胞凋亡率为56.96%,两组差异有统计学意义,P〈C0.01;8305C和8505C细胞中也得到相似的结果。结论:氧调节蛋白150通过调节cHOP的表达调控蛋白酶体抑制剂MG132诱导甲状腺未分化癌细胞凋亡的作用。
  • 蛋白酶体抑制剂对甲状腺未分化癌细胞ATF-4表达影响的研究 相关:甲状腺肿瘤/病理学 细胞凋亡 蛋白酶体抑制剂
  • 目的:探讨蛋白酶体抑制剂对甲状腺未分化癌FRO细胞中活化转录因子4(ATF-4)表达的影响,以及ATF-4在蛋白酶体抑制剂诱导FRO细胞凋亡中的作用。方法:选取人甲状腺未分化癌细胞系FRO,分别设空白对照纽和蛋白酶体抑制剂MG132处理组;利用微小RNA干扰技术,减少ATF-4的表达,实时定量PCR法、蛋白质印迹法分别检测各组细胞中ATF-4、氧调节蛋白150(ORP150)mRNA和蛋白表达;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡。结果:与空白对照组相比,蛋白酶体抑制剂MG132显著增加FRO细胞系中ATF-4基因表达水平,P〈0.01;与空白对照组和随机序列核酸siRNA组相比,siATF-4处理组中ATF-4、ORP150mRNA及蛋白表达水平显著降低(P〈0.01),其凋亡率显著增加,P〈0.01。结论:蛋白酶体抑制剂能够上调甲状腺未分化癌FRO细胞系中ATF4基因的表达水平,siATF-4具有降低ATF-4及OPR150基因表达的作用,同时增加蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺未分化癌FRO细胞的凋亡作用。
  • 蛋白酶体抑制剂对甲状腺未分化癌细胞凋亡影响及其机制的探讨 相关:甲状腺肿瘤/病理 细胞凋亡 蛋白酶体抑制剂
  • 目的:探讨蛋白酶体抑制剂对未分化甲状腺癌FRO细胞中氧调节蛋白150(ORP150)表达的影响,以及ORP150在蛋白酶体抑制剂诱导FRO细胞凋亡中的作用。方法:选取人甲状腺未分化癌细胞系FRO,分别设空白对照组、蛋白酶体抑制剂Lactacystin、PSI、Epoxomycin和MG132处理组;利用微小RNA干扰技术,减少ORP150的表达,实时定量PCR法、蛋白质印迹法分别检测各组细胞中ORP150mRNA和蛋白表达;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡。结果:与空白对照组相比,蛋白酶体抑制剂Lactacystin、PSI、Epoxomycin和MG132均显著增加FRO细胞系中ORP150基因表达水平,P<0.01;与空白对照组和随机序列核酸siRNA组相比,siORP150处理组中ORP150mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01),其凋亡率显著增加,P<0.01。结论:蛋白酶体抑制剂能够上调甲状腺未分化癌FRO细胞系中ORP150基因的表达水平,siOPR150具有特异性降低OPR150基因表达的作用,同时增加蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌FRO细胞凋亡作用。
  • MG132联合自噬抑制剂对A2870卵巢癌细胞抗肿瘤效应的研究 相关:卵巢肿瘤 蛋白酶体抑制剂 自噬
  • 目的:研究蛋白酶体抑制剂MGl32联合自噬抑制剂对A2870卵巢癌细胞的毒性作用。方法:不同浓度蛋白酶体抑制剂MGl32处理A2870细胞,MTT及Hoechst33258核染色方法检测细胞的存活率及凋亡形态学改变;吖啶橙(A0)染色和蛋白质印迹法检测酸性自噬泡的形成及自噬特异性蛋白LC3的变化。多种自噬抑制剂联合MGl32处理后,MTT法检测细胞的存活率。结果:与空白对照组比较,1、2、5和10μmol/L浓度的MGl32作用24h均能明显抑制A2870细胞的生长,细胞存活率分别为(84.38±0.53)%、(65.86±2.34)%、(54.63±2.36)%和(52.16±1.27)%,P值均〈0.05;同时,5μmol/L/MGl32处理后,A2870细胞出现染色质浓缩和核碎片等凋亡特征性形态学改变,且细胞内酸性囊泡细胞器明显蓄积;不同浓度MGl32处理细胞,蛋白质印迹法证实,1μmol/LMGl32即明显增加A2870细胞中LC3-Ⅱ蛋白表达,且随MGl32浓度增加,LC3-Ⅱ表达呈剂量依赖性增加。与MGl32单独作用后A2870细胞存活率(58.32±1.46)%比较,早期自噬抑制剂3-MA和渥曼青霉素能显著增强MGl32抑制A2870细胞的增殖作用,细胞存活率分别为(43.40±2.02)%和(45.35±2.27)%,P值均〈0.05。晚期自噬抑制剂巴佛洛霉素和氯喹则无增强作用,细胞存活率分别为(58.11±2.70)%和(56.76±1.15)%,P值分别为0.558和0.667。结论:蛋白酶体抑制剂MGl32抑制A2870卵巢癌细胞增殖并诱导自噬。早期自噬抑制剂能增加MGl32抗A2870卵巢癌细胞的作用,而晚期自噬抑制剂无明显作用。
  • PRDX1抑制蛋白酶体抑制剂诱导人甲状腺癌细胞凋亡机制探讨 相关:蛋白酶体抑制剂 细胞凋亡信号调节激酶1 过氧化还原蛋白1
  • 目的:初步探讨过氧化还原蛋白1(peroxirodoxin1,PRDX1)抑制蛋白酶体抑制剂诱导人甲状腺癌细胞凋亡的机制。方法:选取人甲状腺癌细胞,设立随机序列核酸siRNA、siASK1、siPRDX1和siASK1+siPRDX1组,分别用培养液、lactacystin和MG132培养细胞;用蛋白印迹法检测PRDX1、ASK1、p38、JNK1/2、p-ASK1、p-P38和p-JNK1/2在各组甲状腺癌细胞中的表达;用微小RNA干扰技术转染细胞;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:MG132处理组中,p-ASK1是对照组的1.5倍(F=214.14,P〈0.001),其下游效应子p-p38和p-JNK1/2分别为对照组的1.34(F=216.75,P〈0.001)和1.94倍(F=1601.68,P〈0.001);siASK1下调MG132介导的p-ASK1为随机序列组的0.58倍(F=1136.82,P〈O.001),p-p38为随机序列组的0.73倍(F=507.00,P〈0.001),p-JNK1/2为随机序列组的0.51倍(F=6087.48,P〈0.001)。甲状腺癌细胞凋亡率降低为34.25%,显著低于于随机序列组的51.98%,F=18.39,P=0.013。MG132处理组中,siPRDX1组甲状腺癌细胞凋亡率为68.99%显著高于随机序列组的49.58%和siPRDX1+siASK1联合组的41.28%,而siASK1组的甲状腺癌细胞凋亡率为31.85%,显著低于上述两组,组间差异有统计学意义,F=30-13,P〈0.001。结论:PRDX1通过负向调节ASK1活性及ASK1-p38和ASK1-JNK通路,抑制ASK1介导的细胞凋亡进而消减MG132对甲状腺癌细胞毒性效应。
  • 蛋白酶体抑制剂对肝癌HepG2细胞BAG3表达影响及其机制探讨 相关:肝肿瘤 蛋白酶体抑制剂 硼替佐米
  • 目的:探讨4种蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezome,BZ)、环氧甲酮四肽(epoxomycin,Epox)、乳孢素(1actacystin,Lacta)和MG132单独作用或者联合JNK特异性抑制剂SP600125,对肝癌HepG2细胞内BAG3蛋白表达的影响及分子机制。方法:空白对照、100nmol/LBZ、100nmol/LEpox、500nmol/LLacta和2umol/LMG132单独或联合50μmol/LSP600125处理HepG2细胞;实时定量RT-PCR检测蛋白酶体抑制剂对肝癌HepG2细胞内BAG3基因mR—NA表达水平影响,蛋白质印迹法检测蛋白酶体抑制剂单独或者联合JNK激酶特异性抑制剂对BAG3蛋白表达水平的影响;利用MTT试剂盒检测蛋白酶体抑制剂细胞存活率,Hoechest33258染色检测细胞凋亡率。结果:蛋白酶体抑制剂BZ、Epox、Lacta和MG132均不同程度上调BAG3基因的mRNA和蛋白表达水平,而SP600125显著抑制蛋白酶体抑制剂引起的BAG3表达上调。MTT结果显示,SP600125显著抑制HepG2细胞对蛋白酶体抑制剂的敏感性;进一步Hoechst33258染色结果显示,4种蛋白酶体抑制剂联合SP600125作用引起HepG2细胞的凋亡率分别为(49.2±3.2)%、(58.7±3.5)%、(56.8±3.4)%和(53.4±3.3)%,明显高于蛋白酶体抑制剂单独作用组的(7.2±2.8)%、(16.7±3.2)%、(12.3±2.9)%和(11.4±3.0)%,P〈0.05。结论:蛋白酶体抑制剂通过JNK信号通路上调BAG3的表达,抑制JNK活性增加了HepG2细胞对蛋白酶体抑制剂的敏感性。